产品货号：
BTN81201
中文名称：
酵母电转感受态细胞制备试剂盒
英文名称：
Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
产品规格：
20次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。
保存：室温，有效期1年。
一、电感受态细胞的制备
按本方法制备1管酵母电转感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
二、电转化酵母感受态细胞
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- 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
- 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
- 主要用于酿酒酵母和粟酒裂殖酵母，但能否用于其他酵母不详。
- 最高转化效率可达到0.2～1×106个转化子/μg质粒DNA。
- 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
- 可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
- 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。
| 组分 | 规格 |
| 酵母电转感受态细胞制备试剂A | 100mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：室温，有效期1年。
- 灭菌水、
- SD液体培养基（不含氨基酸的0.67%Bacto Yeast Nitrogen Base，2%葡萄糖）
- SD固体培养基（在SD液体培养基中再加2%琼脂）
- YPD液体培养基（1%Bacto Yeast Extract，2%Bacto Peptone,2%葡萄糖）
- YPD固体培养基（在YPD液体培养基中再加2%琼脂）
一、电感受态细胞的制备
按本方法制备1管酵母电转感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
- 培养粟酒裂殖酵母细胞：挑取新鲜单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右（相当于1×107细胞/mL）。
- 培养酿酒酵母细胞：挑取新鲜单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右（相当于1×107细胞/mL）。
- 冰上放置15分钟后室温1600rpm离心5min，弃上清
- 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
- 用0.2mL冰浴的酵母电转感受态细胞制备试剂A重悬细胞。
- 按每管0.1mL分装到1.5～2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。
二、电转化酵母感受态细胞
- 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻（快速化冻的效果好于缓慢化冻）。
- 用1mL冰浴的酵母电转感受态细胞制备试剂A洗涤一次。
- 加入50μL冰浴的酵母电转感受态细胞制备试剂A重悬细胞。
- 加入1～30ng质粒DNA并轻柔混匀。
- 转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
- 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对0.2cm的电击杯，则为2kV),5ms(25 F,200)（各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作）。
- 电击后将细胞转移到1mL预冷的本制品中，轻柔混匀。
- 取0.2mL转化细胞涂盘（粟酒裂殖酵母细胞需涂盘在SD固体培养基上，酿酒酵母细胞需涂盘在YPD固体培养基上），30℃培养4～6天。
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